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Location:ホーム実験手法別製品・技術情報PCR・RT-PCR法

 

PCR / RT-PCR法

PCR法は、ゲノムDNAなどをテンプレートにして、増幅したい領域の両端に相補的なプライマーと耐熱性DNAポリメラーゼを用いてサイクル反応(プライマーとのアニーリング→伸長反応→二本鎖の解離)を行うことにより、目的とするDNA領域を増幅する方法です。この方法を応用したDNAプロファイリングに、RAPD(DNA多型)などの解析があります。

PCRの1つの手法であるHot Start法では、実験準備中の非特異的プラミングおよびプライマーダイマーの形成を抑制することで、より増幅性・特異性の高い結果が期待できます。

また、RT-PCR法はcDNAクローニングや遺伝子発現解析に有用な手法です。細胞や組織からRNAを抽出したあとに、プライマーDNA、逆転写酵素によりfirst-strand cDNAを合成します。このcDNAをテンプレートにしてPCRを行います。cDNA合成からPCRまでを連続して行う方法(one-step法)と、cDNA合成とPCRのステップを別途行う方法(two-step法)とがあります。


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