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アルブミンの精製プロセス
20年を超えるルーチン製造が証明する安全性と有効性

  1. はじめに
  2. クロマトグラフィー精製の利点
  3. 血漿供給
  4. 第VIII因子製剤
  5. アルブミン製剤
  6. IgG製剤
  7. 第VIII因子の精製プロセス
  8. アルブミンの精製プロセス(当ページです)
  9. IgGの精製プロセス
  10. 生物学的安全性
  11. 製造プラントのプランニングとエンジニアリング
  12. チェックリスト
  13. 参考文献
  14. 精製プロセスの概要

全体的な流れについては精製プロセスの概要を参照

プロセスクロマトグラフィー

血漿をSephadex G-25 Coarseによるゲルろ過によりプロセス用バッファーに置換します。ユーグロブリンを沈殿により除去し、血漿を陰イオン交換担体DEAE Sepharose Fast Flowを充填したカラムに添加します。初期条件下で、アルブミンは分離担体に結合し、IgG画分は素通りします。

結合したアルブミンを溶出し、次に陽イオン交換体CM Sepharose Fast Flowでさらに精製を行い、ゲルろ過担体Sephacryl S-200 High Resolutionを用いて最終精製を行います。精製したアルブミンをボトルに充填し、欧州薬局方に従い低温殺菌(60℃、10時間)を行います。

図7~10には上記に示し、精製プロセスの概要にまとめた4つのクロマトグラフィーステップでの溶出パターンを示しています。推定の担体寿命を以下に示します。

脱塩およびバッファー交換のデータ
図7. Sephadex G-25 Coarseによる脱塩およびバッファー交換

陰イオン交換クロマトグラフィー のデータ
図8. DEAE Sepharose Fast Flowによる陰イオン交換クロマトグラフィー

陽イオン交換クロマトグラフィー のデータ
図9. CM Sepharose Fast Flowによる陽イオン交換クロマトグラフィー

ゲルろ過クロマトグラフィーのデータ
図10. Sephacryl S-200 High Resolutionによるゲルろ過クロマトグラフィー(カラムを3本直列で接続)

Medium Estimated lifetime (cycles/year)*
Sephadex G-25 Coarse 4000
DEAE Sepharose Fast Flow 300
CM Sepharose Fast Flow 600
Sephacryl S-200 High Resolution 5000

* Or maximum 3 years.

結果および分析

図11~14に、上記に示した方法で製造したアルブミンのポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)および免疫電気泳動法の結果を示します。

図14では、クロマトグラフィー以外の方法で製造した他の市販アルブミン3種類と純度を比較しています。

本方法で製造したアルブミンの特性および欧州薬局方の規定要件を表4に一覧として示しています。

ゲルろ過分析から、純度は98%を超え、凝集体は検出されませんでした(結果表示なし)。プレカリクレイン活性(PKA)は10 IU/mL 未満であり、アルミニウム含量も20 μg/L未満でした。この方法で製造したアルブミンは米国および欧州の薬局方の要件を満たしています。

PAGE写真
図11. アルブミン画分のPAGE(前ページのクロマトグラフィーパターン参照)
1. DEAE Sephcrase Fast Flow工程前
2. CM Sepharose Fast Flow工程後
3. 最終製剤
PhastGel Gradient 8~25 gelを用いてPhastSystemで泳動

アガロース免疫電気泳動写真
図12. 前述の方法で製造したアルブミンとコントロール血漿のアガロース免疫電気泳動

PAGE写真
図13. アルブミン画分のPAGE(前ページのクロマトグラフィーパターン参照)
4. DEAE Sephcrase Fast Flow工程で得たIgG画分
5. DEAE Sephcrase Fast Flow工程で得た第3画分
6. CM Sepharose Fast Flow工程で得た第1画分
7. CM Sepharose Fast Flow工程で得た第3画分
PhastGel Gradient 8~25 gelを用いてPhastSystemで泳動

PAGE写真
図14.記載の方法で製造したアルブミンと他の市販アルブミン3種類とのPAGEによる比較
1~3. 他の市販アルブミン
4. 前述の方法で製造したアルブミン

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